海马等种海洋中药体外抗氧化活性的比较

海洋中药是指在中医药理论指导下用于防病治病和养生保健的物质，其来源包括生活于海水、海底泥滩或岩石、浅海沙滩的动物、植物及海洋中的矿物，也包括生活于海洋周围的、以海洋生物为食的鸟类。《中药大辞典》记载海洋中药共134种，海洋中药的研究、开发与应用滞后于陆地来源中药［1］。海洋生物生存环境特殊，具有陆地生物所没有的化学成分，种类繁多、资源丰富，可再生性强，发展潜力巨大，近年来其研究热点集中在海洋活性产物的研究与开发、海洋微生物的研究与开发、海洋生物基因工程技术等方面。健康长寿是人类幸福的永恒主题，而抗氧化延缓衰老是现代生物科学研究领域热点之一［2-4］，目前有关海洋中药抗氧化活性的研究报道较少。基于此，笔者研究并比较了8种常用海洋中药的体外抗氧化活性，以初步评价其活性。

1 材料与方法

1.1 药材 海马等8种中药于2014年10月购自广东省惠州市惠城区北京同仁堂药店，经惠州学院生命科学系林芳花副教授检定，符合2010年版《中国药典》质量要求，粉碎，过4号筛，备用。

1.2 仪器 FA1104N电子天平(上海精天电子仪器有限公司，精度0.1 mg)、PH050型电热恒温干燥箱(上海实验仪器厂)、HH-4数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)、KH3200DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)、HSX-250恒温恒湿箱(上海申贤恒温设备厂)、UV-2450紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)、SPX-300B-G型光照培养箱(上海博讯实业有限公司)。

1.3 试药 维生素C(Vc)、无水乙醇、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氮蓝四唑(NBT)、核黄素、蛋氨酸、三氯乙酸、氯化铁、铁氰化钾、高锰酸钾、浓硫酸、盐酸等均为分析纯。

1.4 试验方法

1.4.1 对照品溶液的制备。取Vc 0.05 g，精密称定后置于50 ml量瓶中，加水至刻度，使其溶解并摇匀，备用。

1.4.2 样品溶液的制备。取药材粉末各5 g，精密称定后置于100 ml锥形瓶中，加入50%乙醇50 ml，静置30 min，超声处理(功率500 W，频率40 kHz，50℃)30 min，过滤后将滤液置于50 ml量瓶中，加水至刻度后摇匀，备用。

1.4.3 氧化时间的测定。参照2010年版《中国药典》方法［5］并经适当改进，测定氧化时间。精密量取续滤液10 ml，置于具塞锥形瓶中，立即加入20%硫酸溶液2 ml，振荡1 min，立即加入0.02 mol/L 高锰酸钾溶液 0.05 ml，开始计时，直至溶液中紫红色完全消退时停止。

1.4.4 超氧阴离子清除率的测定。参照文献［6］的方法并适当改进，测定超氧阴离子清除率。以0.105 mol/L pH 7.4的PBS缓冲液为溶剂，配制1.67×10-5mol/L核黄素，0.01 mol/L蛋氨酸，9.2×10-5mol/L NBT。分别吸取上述3种溶液各2 ml，加入样品溶液1.0 ml，置于光照培养箱中光照30 min，以缓冲液为对照，于波长560 nm处测定吸光度，按照以下公式计算超氧阴离子清除率:

式中，A0为对照溶液的吸光度，A样为样品溶液的吸光度。

1.4.5 总还原力的测定。参照文献［6］的方法并经适当改进，测定总还原力。取样品溶液0.1 ml，加入0.2 mol/L pH 6.6 磷酸盐缓冲液 2.5 ml，加入 1%铁氰化钾 K3［Fe(CN)6］溶液5.0 ml，置于50℃水浴中反应20 min，迅速冷却，加入10%三氯乙酸溶液2.5 ml，混匀，3 000 r/min离心10 min。取上清液 2.5 ml，加入水 2.5 ml，加入 0.1% 的氯化铁溶液 0.5 ml并混匀，室温下放置10 min，于波长700 nm处测定吸光度。

1.4.6 数据统计与分析。试验数据以平均值±标准差(±s)表示，多组间样本均数的比较采用方差分析，试验数据使用SPSS 10.0统计软件进行统计与分析。

2 结果与分析

2.1 氧化时间 高锰酸钾发生还原反应，Mn7+变为Mn2+，溶液由紫红色变为无色，褪色时间越短，表明待测样品抗氧化活性越强。由表1可知，氧化时间顺序为海马＜海龙＜海藻＜龟甲胶＜海螵蛸＜龟甲＜牡蛎＜瓦楞子，其中海马所需时间最短，与Vc相比无显著差异(P＞0.05)，海龙、海藻和龟甲胶的氧化时间较短，但与Vc相比差异显著(P＜0.05)，海螵蛸、龟甲、牡蛎和瓦楞子的氧化时间较长，与Vc相比差异极显著(P ＜0.01)。

2.2 超氧阴离子清除率 超氧阴离子将NBT还原为蓝紫色物质，在波长560 nm处有最大吸收峰，采用光照核黄素的方法产生超氧阴离子，在抗氧化剂作用下超氧阴离子因为发生歧化反应而减少，对NBT的还原作用减弱，测定吸光度，计算清除率，可以间接反映待测样品的抗氧化活性。由表1可知，超氧阴离子清除率大小顺序为海螵蛸＞龟甲胶＞海龙＞海马＞海藻＞龟甲＞牡蛎＞瓦楞子，其中海螵蛸清除能力最强，与Vc相比无显著差异(P＞0.05)，龟甲胶、海龙、海马、海藻、龟甲的清除能力较强，但与Vc相比有显著差异(P＜0.05)，牡蛎和瓦楞子的清除能力较弱，与Vc相比差异极显著(P ＜0.01)。

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